.: ORİJİNAL ARAŞTIRMA
Nöroblastomda Retinoik Asit ve Sitotoksik Ajanların Kombinasyonlarının Hücre Siklus Proteinlerinden Siklin D1 ve P21 Ekspresyonu Üzerine Etkileri
Effect of Retinoic Acid and Cytotoxic Agent Combinations on Cell Cycle Proteins Cyclin D1 and P21 in Neuroblastoma
Turkiye Klinikleri J Med Sci. 2010;30(3):947-51
doi: 10.5336/medsci.2008-10373
Makale Dili: TR
Tam Metin
ÖZET
Amaç: Siklin D1 çeşitli tümörlerde onkojenik aktivitesi gösterilmiş anahtar hücre siklus regülatör proteinidir. p21 siklin bağımlı kinaz inhibitörü olup hücre siklusunun ilerlemesini önleyen tümör supresörlerdendir. Nöroblastom tedavisinde kullanılan kemoterapötik ajanlar ile siklin D1 ve p21 arasındaki ilişkiyi açıklayan araştırma sayısı yeterli değildir. Bu çalışmanın amacı, nöroblastom hücre hattında kemoterapötik ajanların siklin D1 ve p21 ekspresyonu üzerine etkisini araştırmaktır. Gereç ve Yöntemler: Kelly (N-myc pozitif ) nöroblastoma hücre hattında sisplatin 0.5 µmol/L, vinkristin 0.01 µmol/L, etoposid 0.1 µmol/L, siklofosfamid 2.5 µmol/L, doksorubisin 25 nmol/L ve retinoik asit 0.0001 mol/L ile kombine şekilde 24 saat inkübe edildi. Siklin D1 ve p21 ekspresyonları immunositokimyasal olarak belirlendi. Ekspresyonlar negatif, hafif, orta ve yüksek ekspresyon olarak değerlendirildi. Bulgular: Tek tek ya da retinoik asit ile kombine ilaç uygulamalarında değişik düzeylerde siklin D1 ve p21 ekspresyon değişimleri gözlenmiştir. Ancak retinoik asit ile vinkristin kombinasyonu kontrolde negatif olan p21 ekspresyonunu yüksek pozitif değişime uğratırken, siklin D1 pozitif kontrol ekspresyonu azalmıştır. Sonuç: Bulgular hücre siklus proteinleri üzerine proliferasyonu engellemeye yönelik en etkili ilaç kombinasyonunun retinoik asit ve vinkristin olduğunu desteklemektedir. İkinci sırada etkin olan iki grup retinoik asidin etoposid ve siklofosfamid ile olan ikili kombinasyonlarıdır. Yan etkiler göz önüne alınarak bu kombinasyonların, kronik bir hastalık gibi davrandığı kabul edilen nöroblastomun idame tedavisinde kullanımı in vitro olarak bir kez daha desteklenmiştir.
Anahtar Kelimeler: Nöroblastoma; siklin bağımlı kinaz inhibitörü p21; CCND1 proteini, insan; sitotoksinler
Amaç: Siklin D1 çeşitli tümörlerde onkojenik aktivitesi gösterilmiş anahtar hücre siklus regülatör proteinidir. p21 siklin bağımlı kinaz inhibitörü olup hücre siklusunun ilerlemesini önleyen tümör supresörlerdendir. Nöroblastom tedavisinde kullanılan kemoterapötik ajanlar ile siklin D1 ve p21 arasındaki ilişkiyi açıklayan araştırma sayısı yeterli değildir. Bu çalışmanın amacı, nöroblastom hücre hattında kemoterapötik ajanların siklin D1 ve p21 ekspresyonu üzerine etkisini araştırmaktır. Gereç ve Yöntemler: Kelly (N-myc pozitif ) nöroblastoma hücre hattında sisplatin 0.5 µmol/L, vinkristin 0.01 µmol/L, etoposid 0.1 µmol/L, siklofosfamid 2.5 µmol/L, doksorubisin 25 nmol/L ve retinoik asit 0.0001 mol/L ile kombine şekilde 24 saat inkübe edildi. Siklin D1 ve p21 ekspresyonları immunositokimyasal olarak belirlendi. Ekspresyonlar negatif, hafif, orta ve yüksek ekspresyon olarak değerlendirildi. Bulgular: Tek tek ya da retinoik asit ile kombine ilaç uygulamalarında değişik düzeylerde siklin D1 ve p21 ekspresyon değişimleri gözlenmiştir. Ancak retinoik asit ile vinkristin kombinasyonu kontrolde negatif olan p21 ekspresyonunu yüksek pozitif değişime uğratırken, siklin D1 pozitif kontrol ekspresyonu azalmıştır. Sonuç: Bulgular hücre siklus proteinleri üzerine proliferasyonu engellemeye yönelik en etkili ilaç kombinasyonunun retinoik asit ve vinkristin olduğunu desteklemektedir. İkinci sırada etkin olan iki grup retinoik asidin etoposid ve siklofosfamid ile olan ikili kombinasyonlarıdır. Yan etkiler göz önüne alınarak bu kombinasyonların, kronik bir hastalık gibi davrandığı kabul edilen nöroblastomun idame tedavisinde kullanımı in vitro olarak bir kez daha desteklenmiştir.
Anahtar Kelimeler: Nöroblastoma; siklin bağımlı kinaz inhibitörü p21; CCND1 proteini, insan; sitotoksinler
ABSTRACT
Objective: Cyclin D1 is a key regulatory protein of cell cycle and this oncogenic activity had been observed in a variety of tumors. P21 is a cyclin dependent kinase inhibitor responsible for cell cycle arrest as a tumor suppressor gene. The studies in the literature about effects of retinoic acid and cytotoxic agents on p21 and cyclin D1 are not satisfactory. The aim of this study is to investigate effects of chemotherapotic agents on expression of cell cycle proteins cylin D1 and P21. Material and Methods: Cisplatin, 0.5 µmol/L; vincristine, 0.01 µmol/L; etoposide, 0.1 µmol/L; cyclophospamide, 2.5 µmol/L; doxorubicine, 25 nmol/L; and retinoic acid, 0.0001 mol/L; and their combinations were applied to Kelly human neuroblastoma cell line (N-myc positive) for 24 hours. Cyclin D1 and P21 expressions were analysed with immunocytochemistry method. Expressions were recorded as negative, mild, moderate or high. Results: Cyclin D1 and P21 expression changes were observed in application cytotoxic agents alone or combined with retinoic acid in different degrees. However retinoic acid combined with vincristine is the most noticable group to take into consideration by changing the negativity of p21 to high positivity; and degreesing the expression of cyclin D1 compared to non-treated control neuroblastoma cells. Conclusion: Our results indicate that retinoic acid and vincristine combination is most effective in decraasing proliferation. Second effectivity is shared by combination of retinoic acid with etoposide and combination of retinoic acid with cycophospamide. These in vitro results support the idea of indications of these combinations in neuroblastoma accepted as a chronic disease when side effects are taken into consideration.
Keywords: Neuroblastoma; cyclin-dependent kinase inhibitor p21; ccnd1 protein, human; cytotoxins
Objective: Cyclin D1 is a key regulatory protein of cell cycle and this oncogenic activity had been observed in a variety of tumors. P21 is a cyclin dependent kinase inhibitor responsible for cell cycle arrest as a tumor suppressor gene. The studies in the literature about effects of retinoic acid and cytotoxic agents on p21 and cyclin D1 are not satisfactory. The aim of this study is to investigate effects of chemotherapotic agents on expression of cell cycle proteins cylin D1 and P21. Material and Methods: Cisplatin, 0.5 µmol/L; vincristine, 0.01 µmol/L; etoposide, 0.1 µmol/L; cyclophospamide, 2.5 µmol/L; doxorubicine, 25 nmol/L; and retinoic acid, 0.0001 mol/L; and their combinations were applied to Kelly human neuroblastoma cell line (N-myc positive) for 24 hours. Cyclin D1 and P21 expressions were analysed with immunocytochemistry method. Expressions were recorded as negative, mild, moderate or high. Results: Cyclin D1 and P21 expression changes were observed in application cytotoxic agents alone or combined with retinoic acid in different degrees. However retinoic acid combined with vincristine is the most noticable group to take into consideration by changing the negativity of p21 to high positivity; and degreesing the expression of cyclin D1 compared to non-treated control neuroblastoma cells. Conclusion: Our results indicate that retinoic acid and vincristine combination is most effective in decraasing proliferation. Second effectivity is shared by combination of retinoic acid with etoposide and combination of retinoic acid with cycophospamide. These in vitro results support the idea of indications of these combinations in neuroblastoma accepted as a chronic disease when side effects are taken into consideration.
Keywords: Neuroblastoma; cyclin-dependent kinase inhibitor p21; ccnd1 protein, human; cytotoxins
.: İşlem Listesi