.: ORİJİNAL ARAŞTIRMA
Mitojen Ve Çeşitli Lizatlarla Modifiye Edilen Besiyerlerinin Promastigot Taşıma Kapasiteleri
THE CARRYING CAPACITIES OF THE MEDIA THAT WASMODIFIED WITH MITOGEN AND VARIOUS LYSATES
Turkiye Klinikleri J Med Sci. 1999;19(6):330-6
Makale Dili: TR
Tam Metin
ÖZET
Leyişmaniyoz etkenlerine moleküler yöntemlerin uygulanabilmesi eldeki hücre sayısı ile yakından ilgilidir. Bu çalışmada, bilinen populasyon taşıma kapasitesinin arttırılması ve maksimum hücre sayısına erişme süresinin kısaltılması hedeflendi. Modifiye Evans bifazik besiyerine ek olarak yalın 1x RPMI-1640 besiyerine çeşitli kan ve kan ürünleri katılarak elde edilen yeni modifiye monofazik besiyerleri hazırlandı. Bu besiyerlerine belirli sayıda L.tropica (K-27) ve L.donovani (DD-8) parazitleri ekildi. İnkübasyon sonrası hem yalın 1x RPMI-1640 besiyerinde hem de kan ve kan ürünlerinin ilavesi ile elde edilen yeni modifiye besiyerlerinde, birim hacme düşen parazit sayılarının, daha önce yapılan çalışmalardan elde edilen düzeyi aşamadıkları tespit edildi. Buna karşılık, maksimum hücre sayısına erişme süreleri arasında farklılıklar belirlendi. Buna göre; L.tropica (K-27) ve L.donovani (DD-8) hücreleri modifiye Evans besiyerinde 14., yalın 1x RPMI-1640 besiyerinde 12. ve insan tam kan lizatının eklendiği 1x RPMI-1640 besiyerinde ise dördüncü günde maksimum hücre sayısına eriştiği gözlendi. Ayrıca, mitotik indeksi arttırarak taşıma kapasitesine daha kısa zamanda erişmek amacıyla fitohemaglütinin (PHA) denemesi yapıldı. Farklı derişimlerde fitohemaglütinin, yalın 1x RPMI-1640 besiyerlerine eklendikten sonra L.major (5-ASKH) ekildi ve belirli zaman aralıklarıyla birim hacme düşen hücre sayıları belirlendi. Yapılan çalışmaya göre, besiyerine eklenen mitojen maddenin (PHA) populasyon taşıma kapasitesini ve ikilenme süresini etkilemediği tespit edildi.
Anahtar Kelimeler: Leyişmanya kültürü, kan lizatı, maksimum üreme oranı, taşıma kapasitesi, mitojen maddeler
Leyişmaniyoz etkenlerine moleküler yöntemlerin uygulanabilmesi eldeki hücre sayısı ile yakından ilgilidir. Bu çalışmada, bilinen populasyon taşıma kapasitesinin arttırılması ve maksimum hücre sayısına erişme süresinin kısaltılması hedeflendi. Modifiye Evans bifazik besiyerine ek olarak yalın 1x RPMI-1640 besiyerine çeşitli kan ve kan ürünleri katılarak elde edilen yeni modifiye monofazik besiyerleri hazırlandı. Bu besiyerlerine belirli sayıda L.tropica (K-27) ve L.donovani (DD-8) parazitleri ekildi. İnkübasyon sonrası hem yalın 1x RPMI-1640 besiyerinde hem de kan ve kan ürünlerinin ilavesi ile elde edilen yeni modifiye besiyerlerinde, birim hacme düşen parazit sayılarının, daha önce yapılan çalışmalardan elde edilen düzeyi aşamadıkları tespit edildi. Buna karşılık, maksimum hücre sayısına erişme süreleri arasında farklılıklar belirlendi. Buna göre; L.tropica (K-27) ve L.donovani (DD-8) hücreleri modifiye Evans besiyerinde 14., yalın 1x RPMI-1640 besiyerinde 12. ve insan tam kan lizatının eklendiği 1x RPMI-1640 besiyerinde ise dördüncü günde maksimum hücre sayısına eriştiği gözlendi. Ayrıca, mitotik indeksi arttırarak taşıma kapasitesine daha kısa zamanda erişmek amacıyla fitohemaglütinin (PHA) denemesi yapıldı. Farklı derişimlerde fitohemaglütinin, yalın 1x RPMI-1640 besiyerlerine eklendikten sonra L.major (5-ASKH) ekildi ve belirli zaman aralıklarıyla birim hacme düşen hücre sayıları belirlendi. Yapılan çalışmaya göre, besiyerine eklenen mitojen maddenin (PHA) populasyon taşıma kapasitesini ve ikilenme süresini etkilemediği tespit edildi.
Anahtar Kelimeler: Leyişmanya kültürü, kan lizatı, maksimum üreme oranı, taşıma kapasitesi, mitojen maddeler
ABSTRACT
The molecular methods that can be applied to Leishmania parasites are directly related with the cell number that is present. In this study, it was aimed to increase conventional carrying capacity of culture and to decrease the period to reach the maximum cell number. The medium was prepared as modified Evans biphasic medium and as monophasic RPMI-1640 with blood or blood products. The determined cell numbers of L.tropica (K-27) and L.donovani (DD-8) were inoculated into these media, seperately. The 1x RPMI-1640 media of both type, simple and modified ones did not show any positiveness comparing with the preliminary studies performed with traditional media. However, the reaching periods to full capacity happened to be different. L.tropica (K-27) and L.donovani (DD-8) cells in Evans modified medium and simple 1x RPMI-1640 were highest in 14th, and enriched 1x RPMI-1640 medium with human whole blood lysate reached almost the same level after only four days. In order to reach the full capacity in minimum period of time, we tried to have the advantage of higher mitotic index with phytohaemagglutinin (PHA). The PHA in different concentrations were added into simple 1x RPMI 1640 media, then the media were inoculated with L.major (5-ASKH). Following the cell numbers throughout the cultivation no positive effect was detected at all.
Keywords: Blood lysate, Growth rate, Leishmania culture, Maximum carrying capacity, Mitogen agents
The molecular methods that can be applied to Leishmania parasites are directly related with the cell number that is present. In this study, it was aimed to increase conventional carrying capacity of culture and to decrease the period to reach the maximum cell number. The medium was prepared as modified Evans biphasic medium and as monophasic RPMI-1640 with blood or blood products. The determined cell numbers of L.tropica (K-27) and L.donovani (DD-8) were inoculated into these media, seperately. The 1x RPMI-1640 media of both type, simple and modified ones did not show any positiveness comparing with the preliminary studies performed with traditional media. However, the reaching periods to full capacity happened to be different. L.tropica (K-27) and L.donovani (DD-8) cells in Evans modified medium and simple 1x RPMI-1640 were highest in 14th, and enriched 1x RPMI-1640 medium with human whole blood lysate reached almost the same level after only four days. In order to reach the full capacity in minimum period of time, we tried to have the advantage of higher mitotic index with phytohaemagglutinin (PHA). The PHA in different concentrations were added into simple 1x RPMI 1640 media, then the media were inoculated with L.major (5-ASKH). Following the cell numbers throughout the cultivation no positive effect was detected at all.
Keywords: Blood lysate, Growth rate, Leishmania culture, Maximum carrying capacity, Mitogen agents
.: İşlem Listesi