.: ORİJİNAL ARAŞTIRMA
Different Doses of Radiation on Agar Colony Forming Development in C6 Glioma Cells: Assessment by Thymidine Labeling Index, and Bromodeoxyuridine Labeling Index
C6 Glioma Hücrelerinde Değişik Radyasyon Dozlarında Koloni Oluşturma Etkisi: Timidin İşaretleme İndeksi Ve Bromodeoksiüridin İşaretleme İndeksi İle Değerlendirme
Turkiye Klinikleri J Med Sci. 2007;27(3):321-7
Makale Dili: EN
Tam Metin
ABSTRACT
Objective: Gliomas are relatively frequent in adults, and are among the most malignant primary brain tumors. Glioblastoma multiforme, like many other tumors that exhibit radiation sensitivity in vitro, seems to be very resistant to radiation in vivo, thus suggesting that irradiation may not be a rate-limiting factor for malignant glioma tumor growth. In this study, we aimed to determine the optimal dose of radiation in C6 glioma colony forming assay, which is a valuable tool for antitumor treatment screening. Material and Methods: 105 cell/lamella colony forming cells were radiated with 200 cGy, 400 cGy, 800 cGy and 1600 cGy for 10 minutes. Radiosensitiv-ity was measured systematically 24, 48, 72 and 96 hours after the radia-tion by three methods: soft-agar bilayer assay, thymidinE incorporation, and bromodeoxyuridine (BrdU) incorporation. Results: The soft-agar bilayer assay, which assessed the colony-forming units, showed that the number of colonies in the control group (609, 3 ± 86.8) were decreased after 200 cGy (8.3 ± 3.6) and 400 cGy (7.2 ± 4.3). No colony was detected in 800 cGy and 1600 cGy irradiated cells [3H] Thymidine incorporation was more prominent with higher doses of radiation. BrdU incorporation revealed that even at low doses (200 cGy) of radiation there was a significant decrease of cell proliferation. On higher doses like 1600 cGy it was more prominent. Conclusion: Cell survival, doubling time, and cell phases are parameters of growth kinetics, and the results suggest that C6 glioma cells are radio-sensitive and are virtually affected by all radiation doses in our experi-ment even 200 cGy at 24 hours. Besides, colony forming assay with thymidine labeling index, and BrdU labeling index may be used as new methods for determining radiotherapy doses in clinical applications.
Keywords: Dose fractionation; glioma
Objective: Gliomas are relatively frequent in adults, and are among the most malignant primary brain tumors. Glioblastoma multiforme, like many other tumors that exhibit radiation sensitivity in vitro, seems to be very resistant to radiation in vivo, thus suggesting that irradiation may not be a rate-limiting factor for malignant glioma tumor growth. In this study, we aimed to determine the optimal dose of radiation in C6 glioma colony forming assay, which is a valuable tool for antitumor treatment screening. Material and Methods: 105 cell/lamella colony forming cells were radiated with 200 cGy, 400 cGy, 800 cGy and 1600 cGy for 10 minutes. Radiosensitiv-ity was measured systematically 24, 48, 72 and 96 hours after the radia-tion by three methods: soft-agar bilayer assay, thymidinE incorporation, and bromodeoxyuridine (BrdU) incorporation. Results: The soft-agar bilayer assay, which assessed the colony-forming units, showed that the number of colonies in the control group (609, 3 ± 86.8) were decreased after 200 cGy (8.3 ± 3.6) and 400 cGy (7.2 ± 4.3). No colony was detected in 800 cGy and 1600 cGy irradiated cells [3H] Thymidine incorporation was more prominent with higher doses of radiation. BrdU incorporation revealed that even at low doses (200 cGy) of radiation there was a significant decrease of cell proliferation. On higher doses like 1600 cGy it was more prominent. Conclusion: Cell survival, doubling time, and cell phases are parameters of growth kinetics, and the results suggest that C6 glioma cells are radio-sensitive and are virtually affected by all radiation doses in our experi-ment even 200 cGy at 24 hours. Besides, colony forming assay with thymidine labeling index, and BrdU labeling index may be used as new methods for determining radiotherapy doses in clinical applications.
Keywords: Dose fractionation; glioma
ÖZET
Amaç: Gliomalar erişkinde oldukça sık görülen, kötü gidişli primer beyin tümörlerinin büyük bölümünü oluştururlar. Pek çok tümör gibi glioblastoma multiforme de in vitro radyasyona duyarlıdır, ancak in vivo radyasyon direnci gösterir. Bu sebeple malign glioma tümör geli-şiminde, radyasyon tedavisi sınırlayıcı olmayabilir. Bu çalışmada, anti tümör tedavi taramasında çok uygun bir teknik olabilen "colony forming assay" yöntemi ile C6 glioma hücre hattında en uygun radyas-yon dozunun belirlenmesi amaçlandı. Gereç ve Yöntemler: 105 hücre/lamel içeren "colony forming" hücreleri 10'ar dk. boyunca 200 cGy, 400 cGy, 800 cGy ve 1600 cGy radyas-yona maruz bırakıldı. Radyasyon alan hücrelerdeki radyosensitivite sistematik olarak 24, 48, 72 ve 96 saatlerde "soft-agar bilayer assay" timidin (TLI) ve BrdU (BLI) işaretleme indeksleriyle değerlendirildi. "Soft-agar bilayer assay" oluşan koloni sayılarını belirlemekteydi ve bu sayı kontrol grubunda (609.3 ± 86.8) iken 200 cGy (8.3 ± 3.6) ve 400 cGy (7.2 ± 4.3)'de belirgin olarak azalmıştı. 800 cGy ve 1600 cGy sonrası koloniye rastlanamadı. Bulgular: TLI yüksek dozda, BLI ise düşük dozda (200 cGy) radyasyonun değerlendirilmesinde daha güvenilir bir tekniktir. Bu çalışmada dü-şük doz (200 cGy) radyasyon sonrasında bile hücre proliferasyonunda belirgin bir azalma olmuştur. Bu 1600 cGy yük-sek dozda çok daha belirgindir. Sonuç: Hücre yaşam süreleri, ikilenme zamanları ve hücre fazları büyüme kinetiklerini gösterir. C6 glioma hücreleri radyosensitiftir ve 200 cGY radyasyon dozunda ve 24 saatte bile açıkça etkilenirler. Bu-nunla beraber TLI ve BLI klinik uygulamalarda radyoterapi dozu-nun belirlenmesinde yeni bir metod olarak kullanılabilir.
Anahtar Kelimeler: Radyoterapi doz ayarlama; glioma
Amaç: Gliomalar erişkinde oldukça sık görülen, kötü gidişli primer beyin tümörlerinin büyük bölümünü oluştururlar. Pek çok tümör gibi glioblastoma multiforme de in vitro radyasyona duyarlıdır, ancak in vivo radyasyon direnci gösterir. Bu sebeple malign glioma tümör geli-şiminde, radyasyon tedavisi sınırlayıcı olmayabilir. Bu çalışmada, anti tümör tedavi taramasında çok uygun bir teknik olabilen "colony forming assay" yöntemi ile C6 glioma hücre hattında en uygun radyas-yon dozunun belirlenmesi amaçlandı. Gereç ve Yöntemler: 105 hücre/lamel içeren "colony forming" hücreleri 10'ar dk. boyunca 200 cGy, 400 cGy, 800 cGy ve 1600 cGy radyas-yona maruz bırakıldı. Radyasyon alan hücrelerdeki radyosensitivite sistematik olarak 24, 48, 72 ve 96 saatlerde "soft-agar bilayer assay" timidin (TLI) ve BrdU (BLI) işaretleme indeksleriyle değerlendirildi. "Soft-agar bilayer assay" oluşan koloni sayılarını belirlemekteydi ve bu sayı kontrol grubunda (609.3 ± 86.8) iken 200 cGy (8.3 ± 3.6) ve 400 cGy (7.2 ± 4.3)'de belirgin olarak azalmıştı. 800 cGy ve 1600 cGy sonrası koloniye rastlanamadı. Bulgular: TLI yüksek dozda, BLI ise düşük dozda (200 cGy) radyasyonun değerlendirilmesinde daha güvenilir bir tekniktir. Bu çalışmada dü-şük doz (200 cGy) radyasyon sonrasında bile hücre proliferasyonunda belirgin bir azalma olmuştur. Bu 1600 cGy yük-sek dozda çok daha belirgindir. Sonuç: Hücre yaşam süreleri, ikilenme zamanları ve hücre fazları büyüme kinetiklerini gösterir. C6 glioma hücreleri radyosensitiftir ve 200 cGY radyasyon dozunda ve 24 saatte bile açıkça etkilenirler. Bu-nunla beraber TLI ve BLI klinik uygulamalarda radyoterapi dozu-nun belirlenmesinde yeni bir metod olarak kullanılabilir.
Anahtar Kelimeler: Radyoterapi doz ayarlama; glioma
.: İşlem Listesi